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        昆蟲(chóng)ELISA試劑盒操作流程細則

        更新時(shí)間:2018-10-27      瀏覽次數:2154
        昆蟲(chóng)ELISA試劑盒中文簡(jiǎn)稱(chēng):酶聯(lián)免疫法或酶免法問(wèn):什么是種屬?什么是樣本?答:①種屬就是所謂的,客戶(hù)測得樣本來(lái)源是從什么動(dòng)物,植物,人,等,提取
        的樣本,針對每個(gè)種屬有想對應的試劑盒,例如,從人的部位,收集的樣本,種屬就是人。那試劑盒就是測人的什么什么指標?動(dòng)物的就測動(dòng)物的什么指標等等。
        ②客戶(hù)從種屬身上提取的,包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿,唾液等標本,(能溶的一般情況下都可以測)
        昆蟲(chóng)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)操作流程如下:
        (1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個(gè)平行孔;設兩個(gè)陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個(gè)空白對照孔,加入純細
        胞裂解液100μl。
        (2)酶標板置4℃,包被過(guò)夜。
        (3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿(mǎn)板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿(mǎn)板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內液體后在吸水紙
        上拍干。重復洗滌3-4次。
        (4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
        (5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
        (6)洗板,同(4)。
        (7)昆蟲(chóng)ELISA試劑盒每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
        (8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
        (9)洗板,同(4)。
        (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
        (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
        (12)昆蟲(chóng)ELISA試劑盒分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
        (13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥21為陽(yáng)性判定標準。
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